Plásmido Doble Nickase (m) Mucin 5B/MUC5B: sc-428770-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Mucin 5B/MUC5B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Mucin 5B/MUC5B (m) y el plásmido de doble nickasa Mucin 5B/MUC5B (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Muc5b. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Mucin 5B/MUC5B Anticuerpo (5B#19-2E): sc-21768
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Mucin 5B/MUC5B | sc-428770-NIC | 20 µg | $410.00 |
Muc5b codifica la mucina 5B (MUC5B), una mucina secretada de gran tamaño que forma geles, está fuertemente O‑glicosilada y constituye un determinante estructural principal del moco de las vías respiratorias y de la saliva. La polimerización e hidratación de MUC5B contribuyen al aclaramiento mucociliar, la función de barrera y la defensa innata al moldear las propiedades reológicas de la capa de moco y regular la captura de partículas y patógenos. Su expresión está controlada por programas de diferenciación epitelial y de señalización inflamatoria, incluidas las vías EGFR/MAPK y las vías impulsadas por citocinas que modulan los estados de las células caliciformes/secretoras. La desregulación de Muc5b puede alterar la viscoelasticidad del moco y su eliminación, lo que sustenta investigaciones sobre inflamación crónica de las vías respiratorias, susceptibilidad a infecciones y remodelado fibrótico en modelos murinos.
Mucin 5B/MUC5B El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Muc5b en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Muc5b. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Muc5b. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Muc5b alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.