Mucin 12/MUC12 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400505-NIC

MUC12はムチン12をコードしており、上皮表面に多く存在する膜結合型ムチンです。その高度にO型糖鎖修飾を受けた細胞外ドメインは、保護的なグリコカリックスの形成、バリア機能の維持、ならびに細胞間相互作用に寄与します。頂端膜の構築やムチン依存的なシグナル伝達のクロストークへの影響を介して、MUC12は上皮の分化プログラム、接着ダイナミクス、炎症性刺激に対する応答に影響し得ます。MUC12の異常を含むムチン発現パターンの変化は、上皮リモデリング、慢性炎症、消化管疾患の生物学と関連してしばしば研究されています。広範な糖鎖修飾を受ける細胞表面糖タンパク質として、MUC12は糖鎖付加経路の研究や、グリコカリックス組成が組織恒常性をどのように調節するかを検討する上でも重要です。

Mucin 12/MUC12 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MUC12 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MUC12内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MUC12の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MUC12が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。