MTSS1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404758-ACT

O MTSS1 humano (metastasis suppressor 1) codifica um adaptador que contém um domínio I-BAR e conecta membranas ricas em fosfoinositídeos às redes reguladoras de actina, moldando a curvatura da membrana e coordenando a remodelação do citoesqueleto. O MTSS1 participa de processos como a dinâmica de lamelipódios e filopódios, a endocitose e a adesão célula–célula, por meio de interações com fatores associados à actina e com sinalização dependente de pequenas GTPases. Ao modular a motilidade celular e o comportamento invasivo, o MTSS1 é frequentemente estudado no contexto da diferenciação epitelial, da progressão tumoral e de fenótipos associados à metástase. Alterações na expressão de MTSS1 também têm sido associadas a mudanças em programas de desenvolvimento e em estados transcricionais responsivos ao estresse, relevantes para a biologia do câncer e para modelos de pesquisa em neurobiologia.

MTSS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MTSS1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MTSS1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MTSS1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MTSS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MTSS1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MTSS1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MTSS1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MTSS1 em células tumorais com expressão de MTSS1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.