MTHFD1L Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-417762

Descripción general

MTHFD1L codifica una enzima mitocondrial dependiente de folato que sustenta el metabolismo de un carbono al generar formiato y unidades relacionadas de un carbono que se utilizan para mantener los ciclos de folato citosólicos. Esta actividad conecta el catabolismo mitocondrial de serina/glicina con la biosíntesis de nucleótidos, la capacidad de metilación y el equilibrio redox, e influye en la replicación del ADN y la regulación epigenética. La alteración de la función de MTHFD1L se ha asociado con la remodelación metabólica y fenotipos proliferativos observados en múltiples contextos patológicos, incluido el reordenamiento de la vía de un carbono relacionado con el cáncer. Como resultado, MTHFD1L se estudia con frecuencia en el contexto del metabolismo del folato, la función mitocondrial y la estabilidad del genoma bajo estrés nutricional u oxidativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MTHFD1L (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MTHFD1L en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MTHFD1L junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MTHFD1L tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MTHFD1L.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MTHFD1L para la investigación de la señalización de MTHFD1L, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MTHFD1L críticos para la función de MTHFD1L
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MTHFD1L para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MTHFD1L CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MTHFD1L CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MTHFD1L. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MTHFD1L (h) y el plásmido HDR MTHFD1L (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MTHFD1L para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MTHFD1L definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.