MT-MMP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404075-ACT

MMP15 kodiert die membranverankerte Matrix-Metalloproteinase MT-MMP-2 (MT2-MMP), eine zinkabhängige Endopeptidase, die die perizelluläre extrazelluläre Matrix umgestaltet, indem sie an der Zelloberfläche Kollagene, Laminine und weitere Matrixsubstrate spaltet. Als Teil von Proteasenetzwerken, die den Umsatz fokaler Adhäsionen, Zellmigration und invasives Wachstum koordinieren, beeinflusst MT2-MMP die extrazelluläre Signalübertragung, indem es matrixgebundene Faktoren freisetzt oder aktiviert und die Verfügbarkeit von Rezeptoren moduliert. Die Aktivität von MMP15 überschneidet sich mit integrin- und wachstumsfaktorverknüpften Signalwegen, die die epithelial-mesenchymale Plastizität und Gewebeumbauprozesse prägen. Eine fehlregulierte MT2-MMP-Expression wurde mit pathologischem Matrixumsatz in Zusammenhang gebracht, wie er bei Tumorinvasion, Fibrose und entzündlichen Mikroumgebungen beobachtet wird, was es zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung proteolysegetriebener Umbauprogramme macht.

MT-MMP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MMP15-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MT-MMP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MMP15-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MMP15-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MT-MMP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MMP15-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MT-MMP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MT-MMP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MMP15-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.