MSH2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400966-NIC

MSH2は、DNA複製および組換えの過程で生じる塩基—塩基のミスマッチや挿入／欠失ループを認識する、DNAミスマッチ修復（MMR）機構の中核因子をコードする。MSH2はMutSα（MSH2–MSH6）およびMutSβ（MSH2–MSH3）複合体の一員として、ミスマッチ認識を切除と再合成に結び付ける損傷部位の処理を開始し、ゲノム安定性を維持する。MSH2の機能はDNA損傷応答シグナル伝達とも交差し、複製ストレスの帰結や変異率に影響を与える。MSH2活性の変化は、遺伝性および散発性腫瘍の生物学で広く研究されている、マイクロサテライト不安定性やハイパーミューテーター表現型と強く関連している。

MSH2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MSH2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MSH2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MSH2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MSH2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。