MRTF-B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401793-ACT

Das humane **MKL2**-Gen kodiert den myocardinverwandten Transkriptionsfaktor B (**MRTF-B**), einen von der RhoA‑Aktin-Dynamik abhängigen Koaktivator, der mit **SRF** zusammenwirkt, um zytoskelettale Genprogramme zu regulieren, welche Zellform, Migration und Kontraktilität steuern. Die Aktivität von MRTF-B integriert Signale aus der Aktinpolymerisation und der Mechanotransduktion, um Transkriptionsnetzwerke zu modulieren, die an der Entwicklung der glatten Muskulatur und des kardiovaskulären Systems sowie am Gewebeumbau beteiligt sind. Eine fehlregulierte MKL2/MRTF-B–SRF-Signalgebung wurde in mehreren Modellsystemen mit einer aberranten epithelial-mesenchymalen Transition, invasivem Verhalten und fibroproliferativen Reaktionen in Verbindung gebracht. Als Knotenpunkt, der Aktin-Remodeling mit transkriptionellem Output verknüpft, wird MRTF-B breit in Signalwegen untersucht, die Adhäsion, die Bildung von Stressfasern und die Regulation der extrazellulären Matrix steuern.

MRTF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MKL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MRTF-B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MKL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MKL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MRTF-B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MKL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MRTF-B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MRTF-B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MKL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.