MRP6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402219

Descripción general

ABCC6 codifica el transportador de la familia ABC MRP6, una bomba de eflujo de la membrana plasmática expresada predominantemente en hígado y riñón, que regula la homeostasis extracelular de nucleótidos y metabolitos. La actividad de MRP6 influye en la señalización purinérgica y en el equilibrio del pirofosfato inorgánico, vinculando la función del transportador con vías que controlan la mineralización ectópica y la integridad del tejido conectivo. Las variantes con pérdida de función en ABCC6 se asocian con el pseudoxantoma elástico y fenotipos relacionados de calcificación, lo que lo convierte en una diana relevante para estudiar la remodelación de la matriz extracelular, la calcificación vascular y la biología de transportadores específica de tejido. Los modelos de ABCC6/MRP6 también permiten investigar el tráfico de transportadores ABC, el transporte de sustratos dependiente de ATP y las vías compensatorias entre proteínas de resistencia a múltiples fármacos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MRP6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ABCC6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ABCC6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ABCC6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MRP6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ABCC6 para la investigación de la señalización de MRP6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ABCC6 críticos para la función de MRP6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ABCC6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MRP6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MRP6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ABCC6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MRP6 (h) y el plásmido HDR MRP6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ABCC6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ABCC6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.