MRP5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402443

Panoramica

ABCC5 codifica il trasportatore umano della famiglia ATP-binding cassette MRP5 (ABCC5), una pompa di efflusso di membrana che utilizza l’idrolisi dell’ATP per esportare un’ampia gamma di anioni organici, inclusi nucleotidi ciclici come il cGMP, e altri metaboliti che influenzano la segnalazione intracellulare. Regolando i pool citosolici di nucleotidi e la gestione degli xenobiotici, MRP5 si interfaccia con processi legati al trasporto di membrana, all’equilibrio redox e alle risposte cellulari allo stress. Un’alterata attività di ABCC5/MRP5 è stata associata a cambiamenti nei fenotipi di disposizione dei farmaci e a programmi rilevanti per la malattia che coinvolgono proliferazione e sopravvivenza in molteplici contesti tissutali. Di conseguenza, ABCC5 è spesso studiato in vie che collegano l’omeostasi mediata dal trasporto alla regolazione dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRP5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ABCC5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ABCC5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ABCC5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRP5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ABCC5 per lo studio della segnalazione di MRP5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ABCC5 critici per la funzione di MRP5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ABCC5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MRP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ABCC5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MRP5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRP5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ABCC5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ABCC5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.