MRE11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401510

概要

MRE11はヌクレアーゼをコードしており、RAD50およびNBNとともにMRN複合体を形成してDNA二本鎖切断（DSB）を感知し、ATM依存的なチェックポイントシグナル伝達を協調的に制御します。MRE11は3′→5′エキソヌクレアーゼ活性およびエンドヌクレアーゼ活性を介してDNA末端の切除（エンドリセクション）を促進し、修復を相同組換えへと誘導するとともに、複製ストレス下で停止した複製フォークを安定化します。このゲノム維持における役割により、MRE11はテロメア恒常性、減数分裂期の組換え、ならびに染色体再編成の抑制とも関連づけられています。MRN複合体機能の破綻はゲノム不安定性の表現型と関連し、がん生物学や遺伝性DNA修復疾患の文脈で研究されています。

MRE11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMRE11遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MRE11内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MRE11のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MRE11タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MRE11シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MRE11欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MRE11の機能に不可欠なMRE11エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MRE11ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MRE11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMRE11 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MRE11遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MRE11 HDRプラスミド（h）および MRE11 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMRE11ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMRE11標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。