MRCKγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406697

概要

CDC42BPGは、筋緊張性ジストロフィーキナーゼ関連のCdc42結合キナーゼγ（MRCKγ）をコードしており、Rho GTPアーゼであるCDC42の下流で機能してアクチン‐ミオシン収縮性を協調的に制御するセリン／スレオニンキナーゼです。MRCKγは、ミオシン軽鎖などの細胞骨格制御因子や関連基質をリン酸化し、細胞皮質の張力、細胞極性、方向性のある遊走を調節します。これらの作用を通じて、接着ダイナミクス、形態形成、浸潤性挙動を形作るRho/CDC42依存的シグナル伝達ネットワークに寄与します。MRCKファミリーのシグナル伝達の破綻は、腫瘍細胞の運動性や転移性播種に関わる状況における細胞骨格リモデリングの変化、ならびにより広範な細胞構造の異常と関連することが示されています。

MRCKγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCDC42BPG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CDC42BPG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CDC42BPGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MRCKγタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MRCKγシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CDC42BPG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MRCKγの機能に不可欠なCDC42BPGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CDC42BPGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MRCKγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMRCKγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CDC42BPG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MRCKγ HDRプラスミド（h）および MRCKγ HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCDC42BPGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCDC42BPG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。