mPRε Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-429117-LAC-2

O gene Paqr9 do camundongo codifica o receptor de progesterona de membrana épsilon (mPRε), uma proteína de sete domínios transmembrana da família PAQR implicada na sinalização rápida e não genômica da progesterona na membrana plasmática. Acredita-se que o mPRε module cascatas de segundos mensageiros semelhantes às de GPCRs, incluindo a regulação do AMPc e da dinâmica do cálcio intracelular, influenciando assim programas de sinalização celular ligados à responsividade a hormônios esteroides. A expressão de Paqr9 tem sido associada à fisiologia neuroendócrina e reprodutiva, e alterações na sinalização relacionada à progesterona são relevantes para estudos de fertilidade, regulação do eixo do estresse e biologia de tumores dependentes de hormônios. A edição gênica de Paqr9 em modelos murinos permite a dissecação mecanística de vias esteroidais iniciadas na membrana, do crosstalk do receptor com a sinalização do receptor nuclear de progesterona e de adaptações transcricionais e metabólicas a jusante em tecidos ou tipos celulares definidos.

As Partículas de Ativação Lentivirais mPRε (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Paqr9 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais mPRε (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Paqr9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de mPRε. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Paqr9 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.