MPO/Myeloperoxidase Plasmide Double Nickase (h): sc-400822-NIC

MPO codifica la mieloperossidasi, una perossidasi contenente eme immagazzinata nei granuli azurofili dei neutrofili e rilasciata durante la degranulazione e la formazione delle trappole extracellulari dei neutrofili (NET). MPO catalizza la conversione del perossido di idrogeno e del cloruro in acido ipocloroso e altri ossidanti reattivi correlati, collegando il burst respiratorio dipendente dalla NADPH ossidasi alla chimica effettrice antimicrobica e alla segnalazione redox. Attraverso l’ossidazione di lipidi, proteine e acidi nucleici, l’attività di MPO influenza le cascate di segnalazione infiammatoria, la disfunzione endoteliale e il reclutamento di cellule immunitarie. Un’alterata espressione o attività di MPO è stata associata a una disregolazione dell’immunità innata e a fenotipi di stress ossidativo rilevanti per la biologia delle malattie infiammatorie e vascolari, nonché per studi sul microambiente tumorale.

MPO/Myeloperoxidase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MPO nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MPO. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MPO. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MPO interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.