MPO/Myeloperoxidase Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400822-ACT

Il gene umano **MPO** codifica la mieloperossidasi, una perossidasi contenente eme altamente espressa in neutrofili e monociti che catalizza la conversione del perossido di idrogeno e degli alogenuri in acidi ipoalogenosi, incluso l’acido ipocloroso. Questa chimica ossidativa sostiene la difesa immunitaria innata, la formazione delle trappole extracellulari dei neutrofili (NET) e la modulazione della segnalazione sensibile allo stato redox che influenza infiammazione e rimodellamento tissutale. L’attività di MPO interseca le vie delle specie reattive dell’ossigeno (ROS), la maturazione del fagosoma e le interazioni ospite–patogeno, e può anche promuovere la modificazione ossidativa di proteine e lipidi. Un’espressione o un’attività di MPO deregolata è stata associata a disturbi infiammatori, a un aumento del rischio di malattie cardiovascolari e a fenotipi mieloidi associati ai tumori, rendendola un bersaglio utile per studi meccanicistici su immunometabolismo e stress ossidativo.

MPO/Myeloperoxidase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MPO senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MPO/Myeloperoxidase Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MPO nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MPO, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MPO/Myeloperoxidase. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MPO nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MPO/Myeloperoxidase nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MPO/Myeloperoxidase nelle cellule tumorali con espressione di MPO silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.