Plasmide CRISPR d'Activation (h) MOF: sc-401891-ACT

KAT8 code pour MOF (MYST1), une histone acétyltransférase de la famille MYST qui catalyse l’acétylation de la lysine 16 de l’histone H4 (H4K16ac), une marque chromatiniènne clé associée à une chromatine ouverte et à la compétence transcriptionnelle. MOF agit au sein de complexes multiprotéiques pour réguler l’activité des promoteurs et des enhancers, coordonner l’élongation transcriptionnelle et moduler l’architecture de la chromatine lors de la réplication et de la réparation de l’ADN. Par ces rôles épigénétiques, MOF influence la stabilité du génome, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress ; des altérations de l’activité de KAT8/MOF et des profils d’H4K16ac sont fréquemment étudiées dans le contexte de programmes transcriptionnels oncogéniques et d’une signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN dérégulée. Sa position centrale dans la régulation de la chromatine fait également de KAT8 un nœud utile pour analyser le dialogue entre le remodelage de la chromatine dépendant de l’acétylation et les voies de signalisation contrôlant la prolifération et la différenciation.

MOF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KAT8 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MOF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KAT8 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KAT8, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MOF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KAT8 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MOF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MOF dans les cellules tumorales présentant une expression de KAT8 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.