MMS22L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408097-ACT

MMS22L codifica uma proteína nuclear que forma um complexo funcional com TONSL para sustentar o reparo de DNA mediado por recombinação homóloga durante a fase S, particularmente em forquilhas de replicação estagnadas ou colapsadas. Ao promover o reparo acoplado à replicação e o recrutamento, associado à cromatina, de fatores de reparo, MMS22L contribui para a estabilidade do genoma e para a recuperação adequada do estresse replicativo. A desregulação de vias dependentes de MMS22L está associada ao aumento da sinalização de dano ao DNA, ao processamento aberrante das forquilhas e à instabilidade cromossômica, processos frequentemente explorados em estudos de biologia do câncer e manutenção do genoma. Como fator de resposta ao estresse de replicação, MMS22L é comumente investigada no contexto de redes de resposta a danos no DNA, controle do ciclo celular e sensibilidade a perturbações genotóxicas.

MMS22L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MMS22L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MMS22L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MMS22L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MMS22L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MMS22L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MMS22L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MMS22L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MMS22L em células tumorais com expressão de MMS22L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.