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MMP-8CRISPR激活质粒(h) | sc-402089-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
MMP-8CRISPR激活质粒(h2) | sc-402089-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
人类 MMP8 基因编码基质金属蛋白酶-8(MMP-8),这是一种分泌型、锌依赖性的内肽酶,可切割纤维状胶原以及其他细胞外基质底物,从而调控组织重塑。MMP-8 的活性与炎症信号传导和白细胞募集相互整合,并与细胞外基质组织、趋化因子加工及创伤修复等过程发生交叉。MMP-8 表达或蛋白水解平衡的失调与慢性炎症微环境及基质(间质)动态改变有关,常见于牙周病、关节炎以及肿瘤相关重塑等情境。作为先天免疫反应中与生物标志物相关的蛋白酶,MMP-8 常被用于研究其对细胞迁移、屏障完整性和基质更新的影响。
MMP-8 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MMP8的表达。
MMP-8 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MMP8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MMP8转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MMP-8表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MMP8位点,并能够研究内源性位点上依赖于MMP-8的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MMP8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MMP-8通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。