MLH3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-432245-ACT

Mlh3は、MutLファミリーに属するDNAミスマッチ修復因子MLH3をコードしており、MLH1とヘテロ二量体を形成し、ミスマッチ修復および減数分裂組換えを通じてゲノム維持に寄与します。減数分裂ではMLH1–MLH3がクラスIクロスオーバー形成を促進し、体細胞では複製後の監視機構に関与して変異の蓄積を抑え、染色体の安定性を保ちます。MLH3はまた、複製ストレスやDNA損傷に応答する経路とも連携し、修復能と細胞周期の進行を結び付けています。MLH3機能の変化は、ミスマッチ修復不全、ゲノム不安定性の表現型、ならびにがん生物学や生殖遺伝学研究に関連する、変異駆動性疾患プロセスへの感受性と関連づけられています。

MLH3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mlh3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MLH3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mlh3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMlh3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MLH3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMlh3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMLH3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMlh3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMLH3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。