MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422507

概要

デュアルスペシフィシティホスファターゼ1（Dusp1、MKP-1/DUSP1とも呼ばれる）は誘導性のMAPKホスファターゼであり、ストレス、サイトカイン、増殖因子による刺激後に、ERK1/2、JNK、p38 MAPKを脱リン酸化して不活性化することで、シグナルの持続時間を抑制します。マウス細胞では、DUSP1はMAPK活性を、炎症、アポトーシス、分化、ならびに酸化・遺伝毒性ストレスへの適応を制御する転写プログラムへと結び付ける主要なフィードバック調節因子として機能します。MAPK依存性転写因子や下流のサイトカイン産生を調節することで、DUSP1は自然免疫シグナル伝達および細胞ストレス応答に影響を与えます。DUSP1の発現や活性の異常は、代謝ストレスや腫瘍性ストレスなどの状況における炎症表現型の変化やMAPKシグナル伝達の破綻と関連しており、経路解析のための機構的ハブ（要所）として利用できることを示しています。

MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるDusp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Dusp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Dusp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MKP-1/DUSP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MKP-1/DUSP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Dusp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MKP-1/DUSP1の機能に不可欠なDusp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Dusp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMKP-1/DUSP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Dusp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MKP-1/DUSP1 HDRプラスミド（m）および MKP-1/DUSP1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDusp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDusp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。