Plasmide CRISPR/Cas9 KO Mitochondrial Topo I (h): sc-408700

Présentation

TOP1MT code la topoisomérase I de l’ADN mitochondrial, une topoisomérase de type IB qui résout les contraintes de torsion générées lors de la réplication et de la transcription de l’ADNmt en introduisant des cassures transitoires simple brin, puis en les ressoudant. En maintenant la topologie du génome mitochondrial, TOP1MT soutient l’expression des gènes mitochondriaux, l’organisation des nucléoïdes et la capacité de phosphorylation oxydative. Une altération de la fonction de TOP1MT a été associée à des modifications de l’intégrité de l’ADNmt, à une diminution des performances de la chaîne respiratoire et à une sensibilité accrue au stress mitochondrial. Ces processus sont pertinents pour l’étude du dysfonctionnement mitochondrial dans la neurodégénérescence, les maladies cardiométaboliques et la bioénergétique des cellules cancéreuses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Mitochondrial Topo I (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TOP1MT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TOP1MT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TOP1MT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Mitochondrial Topo I.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TOP1MT pour l'étude de la signalisation de Mitochondrial Topo I, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TOP1MT essentiels à la fonction de Mitochondrial Topo I
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TOP1MT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Mitochondrial Topo I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Mitochondrial Topo I plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TOP1MT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Mitochondrial Topo I plasmide HDR (h) et le Mitochondrial Topo I (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TOP1MT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TOP1MT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.