mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-426664

概要

Ftmtはミトコンドリア・フェリチンをコードしており、これはミトコンドリア・マトリックスに局在する鉄貯蔵タンパク質で、遊離（可動性）鉄を緩衝し、鉄依存性の酸化障害を抑えるのに寄与します。二価鉄を隔離し、ヘムおよび鉄‐硫黄クラスター代謝に影響を与えることで、Ftmtはミトコンドリアの酸化還元恒常性、呼吸機能、ならびに酸化ストレスに対する細胞応答に関与します。ミトコンドリアにおける鉄取り扱いの異常は、フェロトーシス、神経変性、ミオパチーなど、ミトコンドリア機能不全や活性酸素種（ROS）バランスの破綻を特徴とする疾患に関連する経路に関与すると考えられています。マウスモデルでは、Ftmtは代謝系および神経系にわたる組織特異的な鉄輸送、ミトコンドリア品質管理、ストレス適応を解析するために用いられます。

mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるFtmt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ftmt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ftmtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、mitochondrial ferritinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、mitochondrial ferritinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ftmt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• mitochondrial ferritinの機能に不可欠なFtmtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ftmtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびmitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ftmt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  mitochondrial ferritin HDRプラスミド（m）および mitochondrial ferritin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはFtmtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のFtmt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。