Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
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MITF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-421654-KO-2
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MITF O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m2) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MITF, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MITF Anticorpo (D-9): sc-515925
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MITF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) | sc-421654-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Mitf codifica o fator de transcrição associado à microftalmia (MITF), um regulador do tipo basic helix-loop-helix leucine zipper que coordena a especificação de linhagem e os programas de diferenciação em melanócitos e em tipos celulares relacionados derivados da crista neural. O MITF controla redes transcricionais que regulam a pigmentação, a biogênese de melanossomos, a progressão do ciclo celular e a sobrevivência, integrando sinais de vias como MAPK/ERK e cAMP/CREB. Em modelos murinos, alterações na atividade de Mitf afetam o desenvolvimento de melanócitos, fenótipos de pigmentação e funções imunorrelacionadas em mastócitos, vinculando o gene a estudos mecanísticos de melanogênese e plasticidade de linhagem. A desregulação de programas dependentes de MITF é amplamente utilizada para investigar vias relevantes à biologia do melanoma, incluindo a alternância de estados de diferenciação e respostas ao estresse.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MITF (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mitf em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mitf, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mitf na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MITF.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mitf para a investigação da sinalização de MITF, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mitf críticos para a função MITF
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mitf para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MITF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MITF Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mitf. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MITF Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MITF (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mitf para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mitf definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.