Mig-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404390-ACT

FERMT2 codifica a Mig-2 (kindlin-2), uma proteína de adesão focal que se liga às caudas citoplasmáticas das integrinas para regular a ativação de integrinas, a adesão célula–matriz extracelular e a remodelação do citoesqueleto. Por meio do acoplamento à talina, da sinalização da quinase de adesão focal (FAK) e da dinâmica de actina dirigida por GTPases da família Rho, Mig-2 influencia a migração celular, a mecanotransdução e a organização da matriz extracelular. A atividade de FERMT2 integra-se a vias que controlam a plasticidade epitélio–mesenquimal e a remodelação tecidual, tornando-o um alvo frequente em estudos de invasão, programas do tipo fibrótico e sinalização de adesão alterada na biologia do câncer. Associações genéticas e transcriptômicas também vincularam FERMT2 a fenótipos relacionados à neurodegeneração, sustentando sua relevância para mecanismos de adesão e sinalização neuronal em sistemas modelo.

Mig-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FERMT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mig-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FERMT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FERMT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mig-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FERMT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mig-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mig-2 em células tumorais com expressão de FERMT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.