MGAT2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406205-ACT

ヒトのMOGAT2は、MGAT2（monoacylglycerol O-acyltransferase 2）をコードしており、これは小胞体膜に局在する酵素で、モノアシルグリセロールとアシルCoAからジアシルグリセロールを生成する反応を触媒します。ジアシルグリセロールはトリアシルグリセロール合成における重要な中間体です。この活性は、食事由来脂質の取り込みおよび細胞内脂質貯蔵を、より広範なグリセロ脂質代謝およびエネルギー恒常性の経路に結び付け、脂質滴形成や膜脂質組成に影響を与えます。MGAT2依存的なフラックスは、ジアシルグリセロール由来の脂質メディエーターを介した下流シグナル伝達を調節し得るほか、脂肪組織や肝臓における脂質取り扱いを規定する代謝プログラムとも交差します。MOGAT2/MGAT2の制御異常は、脂質異常症、インスリン感受性、脂肪肝に関連する過程などを含む代謝表現型と関連付けられており、脂質駆動性の病態生理の機序研究において重要です。

MGAT2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MOGAT2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MGAT2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MOGAT2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMOGAT2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MGAT2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMOGAT2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMGAT2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMOGAT2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMGAT2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。