Mfn2/Mitofusin 2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400536-LAC

MFN2 codifica la mitofusina 2 (Mfn2), una GTPasi di tipo dinamina localizzata sulla membrana mitocondriale esterna, che media la fusione dei mitocondri e contribuisce a mantenere l’architettura della rete mitocondriale. Oltre alla fusione, Mfn2 partecipa ai siti di contatto tra mitocondri e reticolo endoplasmatico, influenzando lo scambio di calcio, il trasferimento di lipidi e il coordinamento della fosforilazione ossidativa con le esigenze energetiche cellulari. Attraverso questi ruoli, MFN2 incide sulla mitofagia, sull’omeostasi redox e sulle vie di segnalazione della risposta allo stress che modulano la sopravvivenza cellulare e l’adattamento metabolico. Un’attività deregolata di MFN2 è stata associata a neuropatie e a fenotipi più ampi di disfunzione mitocondriale, rendendolo un bersaglio utile per studiare la dinamica degli organelli in modelli rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Mfn2/Mitofusin 2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MFN2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Mfn2/Mitofusin 2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MFN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Mfn2/Mitofusin 2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MFN2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.