Plasmide Double Nickase (h) Mfn2/Mitofusin 2: sc-400536-NIC

MFN2 code la GTPase de la membrane mitochondriale externe Mitofusine 2 (Mfn2), un médiateur central de la fusion mitochondriale et du remodelage du réseau, qui contribue au maintien de l'intégrité de l'ADN mitochondrial, du potentiel de membrane et de la capacité de phosphorylation oxydative. Au-delà de la fusion, Mfn2 participe aux sites de contact entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries (MAM), modulant le transfert de Ca²⁺, les échanges lipidiques et les voies de signalisation liées au stress qui coordonnent le métabolisme cellulaire et l'apoptose. L'activité de MFN2 s'articule avec des programmes de contrôle qualité mitochondrial, notamment la mitophagie et la réponse intégrée au stress, reliant la dynamique des organites à l'adaptation bioénergétique. Une dérégulation de la fonction de MFN2 est impliquée dans la neurodégénérescence et les neuropathies périphériques, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre de dysfonctionnements cardiométaboliques où une morphologie et une signalisation mitochondriales altérées accompagnent le stress cellulaire.

Mfn2/Mitofusin 2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MFN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MFN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MFN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MFN2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.