METTL3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425096-ACT

Mettl3 codifica a METTL3, o núcleo catalítico do complexo metiltransferase de RNA N6-metiladenosina (m6A), que deposita marcas de m6A em mRNA e outros RNAs para regular o splicing, a exportação nuclear, a eficiência de tradução e a estabilidade do RNA. Por meio da coordenação com cofatores como METTL14 e WTAP e com os leitores e “apagadores” (erasers) de m6A a jusante, a METTL3 influencia programas de expressão gênica que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação e as respostas ao estresse. Em sistemas murinos, alterações na atividade de METTL3 têm sido associadas a mudanças em decisões de destino de células hematopoéticas e imunológicas, a processos de neurodesenvolvimento e à regulação metabólica, refletindo seu amplo impacto nas vias de processamento de RNA. A sinalização de m6A desregulada também está associada a estados transcricionais oncogênicos e inflamatórios, tornando Mettl3 um alvo amplamente utilizado para estudar o controle epitranscritômico de fenótipos relevantes para doenças.

METTL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Mettl3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

METTL3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Mettl3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Mettl3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de METTL3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Mettl3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de METTL3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via METTL3 em células tumorais com expressão de Mettl3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.