Plásmido CRISPR de Activación (bovine) METTL3: sc-437359-ACT

METTL3 codifica el núcleo catalítico del complejo metiltransferasa de ARN N6‑metiladenosina (m6A), un regulador epitranscriptómico clave del destino del ARNm y del ARN no codificante en células bovinas. Al depositar marcas de m6A, METTL3 influye en el empalme del ARN, la exportación nuclear, la eficiencia de traducción y la estabilidad de los transcritos, integrándose con vías que gobiernan la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación, las respuestas al estrés y la señalización inmunitaria innata. La actividad alterada de METTL3 se asocia ampliamente con redes de expresión génica desreguladas y con fenotipos relevantes para la transformación oncogénica, la señalización inflamatoria y defectos del desarrollo en distintas especies. En modelos biomédicos y comparativos bovinos, la modulación de METTL3 respalda estudios mecanísticos del control del estado celular y de los circuitos reguladores génicos dependiente de la metilación del ARN.

METTL3 El plásmido de activación CRISPR (bovine) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

METTL3 El plásmido de activación CRISPR (bovine) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional , donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de METTL3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de METTL3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía METTL3 en células tumorales con expresión de silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.