Metallothionein 1F Double Nickaseプラスミド (h): sc-417937-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Metallothionein 1F Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Metallothionein 1Fダブルニカースプラスミド（h）およびMetallothionein 1Fダブルニカースプラスミド（h2）は、MT1Fを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Metallothionein 1F Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Metallothionein 1F Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MT1Fは、低分子量でシステインに富む金属結合タンパク質であるメタロチオネイン1Fをコードしており、亜鉛や銅などの必須微量金属の細胞内恒常性の維持や、カドミウムおよび水銀を含む有害金属の隔離に寄与します。可動性（ラビル）亜鉛プールを緩衝することで、MT1Fは酸化還元バランス、金属依存性酵素の活性、ならびに酸化ストレスや求電子ストレスに応答する転写プログラムに影響を及ぼし得ます。メタロチオネインファミリーのメンバーは一般に、細胞のストレス適応経路と関連づけられており、チオール基を基盤とした酸化還元化学を介して、金属曝露や活性酸素種に対する感受性を調節する可能性があります。MT1Fの発現変化は、金属代謝や酸化ストレスシグナル伝達におけるがん関連の変化を含む、複数の疾患関連の状況で報告されており、ストレス応答および解毒生物学の機構研究に有用な標的となっています。
Metallothionein 1F ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MT1F 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MT1F内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MT1Fの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MT1Fが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。