MerTK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401629-ACT

O MERTK humano codifica a tirosina-quinase receptora MerTK, um membro da família TAM que reconhece a fosfatidilserina em células apoptóticas por meio de ligantes como GAS6 e PROS1, promovendo a eferocitose e a resolução da inflamação. A sinalização de MerTK envolve as vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e STAT para coordenar programas homeostáticos de macrófagos e micróglia, atenuar a ativação imune inata e influenciar a sobrevivência e a migração celulares. No microambiente tumoral, a depuração dependente de MerTK e a sinalização imunorregulatória podem moldar a produção de citocinas e a função de células apresentadoras de antígeno, enquanto no sistema nervoso contribui para a atividade fagocítica da micróglia e para a remodelação tecidual. A expressão ou a sinalização desregulada de MERTK tem sido associada a alterações no tônus inflamatório e à fagocitose aberrante em contextos de pesquisa em biologia do câncer e neuroinflamação.

MerTK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MERTK sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MerTK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MERTK em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MERTK, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MerTK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MERTK nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MerTK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MerTK em células tumorais com expressão de MERTK silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.