MEK-5 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401688-NIC

MAP2K5はMEK-5をコードしており、MEK-5は二重特異性をもつMAPキナーゼキナーゼ（MAPKK）として、ERK5（MAPK7）を選択的にリン酸化して活性化し、増殖・分化・ストレス適応・細胞骨格リモデリングに関連する転写プログラムを制御します。MEK-5–ERK5シグナル伝達は、増殖因子や環境からの刺激入力を統合し、MEF2ファミリーの転写調節因子などの下流因子に影響を与えることで、細胞生存や細胞運動性の応答を形成します。MAP2K5/ERK5軸の制御異常は、がん性経路の再配線、心血管生物学、炎症シグナルなどの文脈におけるシグナル伝達の変化と関連づけられており、経路クロストークを解明するための有用な結節点（ノード）としてMAP2K5が注目されています。ヒト細胞モデルでは、MEK-5活性を攪乱することにより、MAPKネットワークの特異性や、並列するMAPKカスケード間での代償的シグナル伝達に関する機序解析が可能になります。

MEK-5 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MAP2K5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MAP2K5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MAP2K5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MAP2K5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。