MEF-2D Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403475-NIC

MEF2D codifica o fator de transcrição humano MEF-2D, uma proteína de ligação ao DNA da família MADS-box/MEF2 que integra a sinalização dependente de cálcio com programas de expressão gênica específicos do contexto. O MEF-2D regula a diferenciação e a transcrição adaptativa em múltiplas linhagens, incluindo estados miogênicos e neuronais, ao cooperar com cofatores como HDACs de classe IIa e ao responder às vias de MAPK e calcineurina. Por meio dessas interações responsivas à sinalização, o MEF-2D ajuda a coordenar o estado da cromatina e os resultados transcricionais que moldam o controle do ciclo celular, a sobrevivência e a identidade de linhagem. A atividade desregulada de MEF2D e redes transcricionais alteradas conduzidas por MEF2D têm sido implicadas na reprogramação transcricional associada ao câncer e na genética de neoplasias hematológicas, sustentando seu uso como um nó funcional em estudos de vias e mecanismos de doença.

MEF-2D O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MEF2D em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MEF2D. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MEF2D. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MEF2D interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.