MECL-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2): sc-402101-NIC-2

O gene humano PSMB10 codifica a subunidade beta tipo 10 do proteassoma (MECL-1), um componente catalítico induzível do imunoproteassoma que substitui subunidades β constitutivas para remodelar as preferências de clivagem proteolítica durante a sinalização inflamatória. A MECL-1 sustenta a renovação de proteínas mediada pelo sistema ubiquitina–proteassoma e melhora o processamento de antígenos para o MHC de classe I, conectando respostas impulsionadas por interferon à vigilância imune adaptativa e à modulação de programas de proteostase associados ao NF-κB. A desregulação da composição ou da atividade do imunoproteassoma está implicada em alterações na apresentação de antígenos e na ativação imune crônica observadas em contextos de autoimunidade, infecção e evasão imune tumoral. A edição gênica de PSMB10 permite investigar mecanisticamente os repertórios de peptídeos dependentes do imunoproteassoma, o controle de qualidade do proteoma sob estresse por citocinas e a reconfiguração de vias imunes em modelos celulares humanos.

MECL-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h2) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PSMB10 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PSMB10. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PSMB10. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PSMB10 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.