ME3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417146

Übersicht

Das menschliche ME3 kodiert das mitochondriale, NADP-abhängige Malatenzym, das die oxidative Decarboxylierung von Malat zu Pyruvat katalysiert und dabei gleichzeitig NADPH produziert. Durch die Verknüpfung des Tricarbonsäurezyklus mit der mitochondrialen Redoxkontrolle unterstützt ME3 reduktive Äquivalente für biosynthetische Prozesse, die antioxidative Abwehr und metabolische Flexibilität unter wechselnden Nährstoffbedingungen. Die ME3-Aktivität beeinflusst Signal- und Stoffwechselwege, die an Anaplerose/Kataplerose, der Pufferung reaktiver Sauerstoffspezies und der mitochondrialen Funktion beteiligt sind, und ist damit relevant für Studien zu metabolischer Umprogrammierung und Redoxstress. Veränderte ME3-Expression oder -Abhängigkeit wurde in Kontexten untersucht, in denen das mitochondriale NADPH-Gleichgewicht und der oxidative Stoffwechsel zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen, einschließlich Krebsstoffwechsel und mitochondrialer Dysfunktion.

Das ME3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ME3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ME3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ME3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ME3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ME3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ME3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ME3-Exone abzielen, die für die ME3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ME3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ME3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ME3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ME3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ME3 HDR-Plasmid (h) und ME3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ME3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ME3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.