MDHC Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-416827-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MDHCO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase MDHC (h) e o Plasmídeo Double Nickase MDHC (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para MDH1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MDHC Anticorpo (H-6): sc-166879
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MDHC Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-416827-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDHC Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-416827-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MDH1 codifica a malato desidrogenase citosólica (MDHC), uma enzima dependente de NAD+/NADH que interconverte malato e oxaloacetato, conectando o fluxo de carbono derivado da glicólise ao ciclo do ácido tricarboxílico por meio da lançadeira malato–aspartato. Ao sustentar o equilíbrio redox citosólico e a transferência de NADH para as mitocôndrias, a MDHC ajuda a coordenar o metabolismo energético, a anaplerose e a disponibilidade de precursores biossintéticos. A atividade de MDH1 está intimamente ligada às respostas celulares ao estado nutricional e ao estresse oxidativo, por meio da regulação das razões citosólicas NADH/NAD+. Alterações na expressão de MDH1 ou uma reprogramação metabólica envolvendo o ciclo malato/oxaloacetato foram observadas em contextos de doenças metabólicas e proliferativas, motivando estudos mecanísticos em modelos de células humanas.
MDHC O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MDH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MDH1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MDH1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MDH1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.