MDH2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402825-ACT

ヒトMDH2は、NAD+/NADHを用いてリンゴ酸をオキサロ酢酸へ可逆的に変換する反応を触媒するミトコンドリア型リンゴ酸脱水素酵素をコードしており、トリカルボン酸（TCA）回路における重要な酵素反応の一段階を担う。ミトコンドリアの酸化還元バランスを酸化的代謝と結び付けることで、MDH2はATP産生、アナプレロティック・フラックス（補充反応）、ならびに解糖系・TCA回路・アミノ酸生合成の間の代謝カップリングを支える。MDH2活性は、栄養状態やミトコンドリアストレスに対する細胞応答に影響し、その下流で活性酸素種（ROS）の制御やバイオエネルギー適応にも作用する。MDH2の発現量や機能の変化は、増殖性病態や神経変性の文脈でみられる代謝リプログラミングと関連しており、ミトコンドリア機能不全やレドックス依存的シグナル伝達の研究において重要である。

MDH2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MDH2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MDH2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MDH2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMDH2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MDH2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMDH2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMDH2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMDH2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMDH2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。