MDC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422840
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- MDC O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico MDC, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:MDC Anticorpo (R-19): sc-74223
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
MDC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422840 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ccl22 codifica a quimiocina MDC (macrophage-derived chemokine), um ligante de CCR4 que promove a migração dirigida de células imunitárias, particularmente células T CD4+ polarizadas para Th2, células T reguladoras e outros leucócitos que expressam CCR4. A MDC é produzida por macrófagos, células dendríticas e outras populações estromais/imunitárias em resposta a sinais inflamatórios, moldando o tráfego de leucócitos, as respostas induzidas por antigénios e a composição imunitária dos tecidos. Por meio de sinalização via recetores de quimiocinas que envolve vias dependentes de GPCR como PI3K–AKT e MAPK e modula a dinâmica do citoesqueleto, Ccl22 contribui para a homeostase imunitária e para microambientes inflamatórios locais. A desregulação da sinalização Ccl22/MDC tem sido associada a padrões alterados de recrutamento de células T, relevantes para inflamação alérgica, autoimunidade e interações tumor–imunidade em modelos murinos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MDC (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ccl22 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ccl22, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ccl22 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MDC.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ccl22 para a investigação da sinalização de MDC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ccl22 críticos para a função MDC
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ccl22 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo MDC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MDC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ccl22. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo MDC Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MDC (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ccl22 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ccl22 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.