MCT3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403973-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MCT3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MCT3 Double Nickase Plasmid (h) e il MCT3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC16A8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MCT3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MCT3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC16A8 codifica il trasportatore di monocarbossilati 3 (MCT3), un carrier di soluti accoppiato ai protoni che media il trasporto transmembrana del lattato e di altri monocarbossilati, contribuendo all’omeostasi del pH cellulare e all’accoppiamento metabolico. Nei tessuti oculari umani, MCT3 è particolarmente espresso nell’epitelio pigmentato retinico e contribuisce all’efflusso di lattato dalla retina esterna, collegando il flusso glicolitico al metabolismo ossidativo attraverso le barriere epiteliali. In quanto membro della famiglia SLC16, MCT3 opera all’interno di vie più ampie di trasporto dei monocarbossilati e di regolazione acido-base che influenzano l’equilibrio redox e la segnalazione mediata dai metaboliti. Alterazioni nella gestione dei monocarbossilati e una disregolazione del trasporto del lattato sono state implicate nella fisiologia retinica e in processi rilevanti per la patologia, rendendo SLC16A8 un bersaglio utile per indagare i meccanismi di trasporto metabolico.
MCT3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC16A8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC16A8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC16A8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC16A8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.