MCM4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402451-ACT

ヒトMCM4は、複製開始点のライセンシングを行い、S期にDNA二重らせんの巻き戻しを駆動するMCM2–7ヘリカーゼ複合体の中核サブユニットをコードしている。MCM4は、複製開始（origin firing）、複製フォークの進行、ならびに複製チェックポイント応答を協調させることで、DNA複製およびDNA損傷応答（DDR）経路におけるゲノム安定性の維持に寄与する。MCM4活性の攪乱は、複製ストレス、フォーク崩壊、DNA損傷の蓄積を促進し得るが、これらの過程はがん生物学やその他の増殖性疾患で観察される染色体不安定性と関連している。そのためMCM4は、細胞周期制御、複製ストレスシグナル伝達、DNA修復経路間のクロストークを研究するための機構的ハブ（ノード）として広く用いられている。

MCM4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MCM4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MCM4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MCM4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMCM4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MCM4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMCM4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMCM4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMCM4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMCM4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。