MBNL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401921-ACT

A MBNL2 humana (muscleblind-like splicing regulator 2) é uma proteína de ligação a RNA que controla o splicing alternativo de pré-mRNA, a localização de mRNA e a estabilidade de transcritos ao reconhecer motivos ricos em YGCY em RNAs-alvo. Ela ajuda a coordenar programas de isoformas específicos de tecidos e do desenvolvimento que influenciam a organização do citoesqueleto, a diferenciação celular e o processamento de RNA responsivo ao estresse. A desregulação da atividade da família MBNL está intimamente ligada à troca aberrante de splicing observada na distrofia miotônica e em outras doenças por expansão de repetições, e redes de splicing dependentes de MBNL2 alteradas têm sido associadas a fenótipos neuromusculares e de neurodesenvolvimento. Assim, modular os níveis de MBNL2 é útil para dissecar os circuitos de fatores de splicing, vias do metabolismo de RNA e mecanismos específicos de isoformas em modelos celulares humanos.

MBNL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MBNL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MBNL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MBNL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MBNL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MBNL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MBNL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MBNL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MBNL2 em células tumorais com expressão de MBNL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.