MBLAC2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406416

Panoramica

MBLAC2 codifica una proteina contenente un dominio di metallo-β-lattamasi, implicata in reazioni idrolitiche metallo-dipendenti e in processi di detossificazione cellulare. La sua attività enzimatica prevista suggerisce un ruolo nella regolazione del metabolismo di piccole molecole e nel mantenimento dell’omeostasi cellulare in condizioni di stress ossidativo o da xenobiotici. Un’espressione alterata di membri della famiglia delle metallo-β-lattamasi è stata riportata in molteplici contesti patologici, a supporto dell’interesse a studiare MBLAC2 in vie collegate alle risposte allo stress, alla riprogrammazione metabolica e alla sopravvivenza cellulare. Studi funzionali su MBLAC2 possono chiarire come i processi associati alle metalloidrolasi si intersechino con le reti metaboliche mitocondriali e citosoliche nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MBLAC2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MBLAC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MBLAC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MBLAC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MBLAC2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MBLAC2 per lo studio della segnalazione di MBLAC2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MBLAC2 critici per la funzione di MBLAC2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MBLAC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MBLAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MBLAC2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MBLAC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MBLAC2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MBLAC2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MBLAC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MBLAC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.