Mast Cell Protease 5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421601

Visão geral

Cma1 codifica a protease 5 de mastócitos de camundongo, uma serinoprotease da família das quimases armazenada em grânulos secretórios de mastócitos do tipo tecido conjuntivo e liberada após a desgranulação induzida por FcεRI. A protease 5 de mastócitos participa do remodelamento da matriz extracelular e da regulação de mediadores vasoativos e pró-inflamatórios por meio do processamento proteolítico de peptídeos e de substratos relacionados a citocinas, modulando o recrutamento de leucócitos e as respostas teciduais. Por meio dessas atividades, contribui para vias subjacentes à inflamação alérgica, à hiper-reatividade das vias aéreas e à fibrose tecidual, sendo frequentemente estudada em modelos de inflamação cutânea e de remodelamento cardiopulmonar. Alterações na atividade da protease 5 de mastócitos têm sido associadas a mudanças na comunicação entre imunidade inata e adaptativa e na homeostase de tecidos de barreira em contextos de doenças inflamatórias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Mast Cell Protease 5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cma1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cma1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cma1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Mast Cell Protease 5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cma1 para a investigação da sinalização de Mast Cell Protease 5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cma1 críticos para a função Mast Cell Protease 5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cma1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Mast Cell Protease 5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Mast Cell Protease 5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cma1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Mast Cell Protease 5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Mast Cell Protease 5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cma1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cma1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.