MARCKSL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403985-ACT

MARCKSL1 (MARCKS-like 1) codifica uma proteína associada à membrana e com capacidade de ligação à actina, que regula a remodelação do citoesqueleto, a polaridade celular e a motilidade por meio de interações dependentes de fosforilação com fosfolípidos e com a F-actina. Como efetor a jusante da sinalização da PKC, o MARCKSL1 participa em vias que coordenam o crescimento de neuritos, a dinâmica de lamelipódios e o tráfego vesicular, ligando sinais extracelulares a alterações na forma celular. Alterações na expressão de MARCKSL1 têm sido associadas a fenótipos invasivos e à progressão metastática em múltiplos contextos tumorais, em consonância com o seu papel na migração e na adesão. Estas propriedades fazem do MARCKSL1 um alvo útil para estudar mecanismos dependentes do citoesqueleto subjacentes ao desenvolvimento, a respostas do tipo cicatrização e à disseminação de células cancerígenas.

MARCKSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MARCKSL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MARCKSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MARCKSL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MARCKSL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MARCKSL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MARCKSL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MARCKSL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MARCKSL1 em células tumorais com expressão de MARCKSL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.