MAL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403024

Panoramica

MAL (myelin and lymphocyte protein) è una proteina di membrana idrofobica a quattro domini transmembrana, arricchita in microdomini di membrana ricchi di glicolipidi e colesterolo, dove contribuisce al traffico verso la membrana apicale e alla stabilizzazione dell’architettura epiteliale polarizzata. Partecipa a processi di smistamento e trasporto vescicolare che influenzano l’organizzazione delle giunzioni cellula-cellula e la distribuzione delle proteine di membrana. L’espressione di MAL è spesso utilizzata come marcatore dello stato di differenziazione nelle linee epiteliali ed è stata associata ad alterazioni della dinamica di membrana in diversi contesti tumorali, inclusi casi riportati di silenziamento epigenetico o di espressione deregolata collegati alla progressione tumorale e alla segnalazione correlata al sistema immunitario. Queste proprietà rendono MAL un bersaglio utile per studiare la compartimentalizzazione di membrana, il trasporto polarizzato e i fenotipi legati alla plasticità epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAL (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MAL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MAL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MAL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAL.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MAL per lo studio della segnalazione di MAL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MAL critici per la funzione di MAL
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MAL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MAL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MAL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MAL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MAL Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MAL (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MAL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MAL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.