MAGE-A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401056

概要

MAGEA1は、通常は生殖細胞に限局して発現する一方で、多様ながんで高頻度に再発現し、腫瘍関連の転写プログラムやプロテオスタシス（タンパク質恒常性）プログラムに寄与し得るがん精巣抗原MAGE-A1をコードします。MAGE-A1はI型MAGEファミリーに属し、E3リガーゼ活性の制御やシグナル伝達因子の分解・更新を含む、ユビキチン依存性経路を調節するタンパク質間相互作用に関与するとされています。MAGEA1の異常発現は、細胞周期制御、ストレス応答、免疫認識に関わる表現型の変化と関連し、腫瘍の生物学的性質を形作ります。系譜特異的抗原として、MAGE-A1は腫瘍免疫原性やエピジェネティックな脱抑制を研究する際の分子マーカーとしても広く用いられています。

MAGE-A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAGEA1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAGEA1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAGEA1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MAGE-A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MAGE-A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAGEA1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MAGE-A1の機能に不可欠なMAGEA1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAGEA1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MAGE-A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMAGE-A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAGEA1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MAGE-A1 HDRプラスミド（h）および MAGE-A1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAGEA1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAGEA1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。