Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
MAF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427213
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MAF1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MAF1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MAF1 Antibody (H-2): sc-515614
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MAF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-427213 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Maf1 codifica MAF1, un repressore trascrizionale conservato che modula l’attività dell’RNA polimerasi III e coordina i processi biosintetici con i segnali di nutrienti e stress. Nelle cellule murine, l’attività di MAF1 integra TORC1/mTOR e altre vie chinasi per controllare la trascrizione di tRNA e 5S rRNA, collegando lo stato metabolico alla proteostasi e alla crescita cellulare. Attraverso la regolazione della trascrizione dipendente da Pol III, MAF1 influenza la proliferazione, le risposte allo stress cellulare e i programmi di omeostasi energetica. La deregolazione del controllo di Pol III e delle vie di segnalazione metabolica è stata associata a fenotipi di crescita alterati e a processi rilevanti per la patologia, rendendo Maf1 un nodo utile per studi meccanicistici su metabolismo, adattamento allo stress e controllo della crescita.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MAF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Maf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Maf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Maf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MAF1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Maf1 per lo studio della segnalazione di MAF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Maf1 critici per la funzione di MAF1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Maf1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Maf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MAF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MAF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Maf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Maf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.