mAChR M3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400829-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mAChR M3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mAChR M3 Double-Nickase-Plasmid (h) und mAChR M3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRM3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mAChR M3: sc-518107
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mAChR M3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400829-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mAChR M3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400829-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRM3 kodiert den humanen muskarinischen Acetylcholinrezeptor M3 (mAChR M3), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der überwiegend an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase Cβ zu aktivieren, intrazelluläres Ca²⁺ zu erhöhen und PKC‑abhängige Signalwege zu stimulieren. Über die Hydrolyse von PIP2 sowie nachgeschaltete MAPK‑ und transkriptionelle Programme reguliert mAChR M3 die Kontraktion glatter Muskulatur, Drüsensekretion und neuronale Erregbarkeit. Die Rezeptoraktivität ist in die Calciumhomöostase, das Remodeling des Zytoskeletts und zellzyklusgekoppelte Signalnetzwerke eingebunden, die die Gewebephysiologie und Stressantworten prägen. Veränderte CHRM3‑Signalgebung wurde im Zusammenhang mit der Atemwegs‑ und Gastrointestinalfunktion, der metabolischen Regulation sowie proliferativen Signalzusammenhängen untersucht, die für die Onkologie‑ und Neurobiologieforschung relevant sind.
mAChR M3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRM3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRM3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRM3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRM3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.