M-CSF Plasmide Double Nickase (h): sc-401339-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- M-CSF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il M-CSF Double Nickase Plasmid (h) e il M-CSF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CSF1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: M-CSF Antibody (D-4): sc-365779
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
M-CSF Plasmide Double Nickase (h) | sc-401339-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
M-CSF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401339-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSF1 codifica il fattore stimolante le colonie dei macrofagi (M-CSF), una citochina secreta che regola la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione dei monociti in macrofagi e osteoclasti. M-CSF segnala principalmente attraverso CSF1R attivando le vie PI3K–AKT, MAPK/ERK e JAK/STAT, contribuendo all’omeostasi dell’immunità innata, alla funzione fagocitaria e al rimodellamento tissutale. Un’alterazione della segnalazione CSF1–CSF1R è associata a risposte infiammatorie disregolate e a una polarizzazione anomala dei macrofagi, con effetti a valle sul turnover osseo e sul dialogo tumore–stroma nel microambiente. In quanto regolatore della biologia della linea mieloide, M-CSF è spesso studiato in relazione ai percorsi che controllano l’osteoclastogenesi, la riparazione delle ferite e i programmi di differenziazione guidati dalle citochine.
M-CSF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CSF1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CSF1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CSF1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CSF1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.