Lyst CRISPR Activationプラスミド (h): sc-410730-ACT

ヒトのLYST（lysosomal trafficking regulator：リソソーム輸送制御因子）遺伝子は、Lystという大型の細胞質タンパク質をコードしており、後期エンドソーム‐リソソーム融合およびカーゴ輸送に必要な、リソソーム関連小器官のサイズ、局在（配置）、ならびに膜動態を制御します。Lystは小胞の分裂・融合イベントの調節を通じて、分解系リソソーム機能、抗原プロセシング、そして免疫細胞や色素細胞における特殊顆粒からの分泌に影響を与えます。LYST活性の制御異常は、リソソーム恒常性の破綻や、異常に巨大な顆粒の形成と関連し、自然免疫・獲得免疫の細胞機能を損なうため、免疫不全や色素形成（ピグメンテーション）生物学の研究において重要です。そのためLYSTは、細胞内輸送を司る経路、オートファジーとリソソームのクロストーク、ならびに小器官ターンオーバー障害に対するストレス応答に関する研究で、しばしば解析対象となります。

Lyst CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LYSTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Lyst CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LYST 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLYST転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Lystの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLYST遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるLyst依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLYST発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるLyst経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。