LYSMD3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409014-ACT

O gene humano **LYSMD3** codifica uma proteína associada à membrana que contém um domínio LysM, implicada na deteção imunitária inata em interfaces mucosas e epiteliais. Motivos LysM mediamente, com frequência, a ligação a estruturas microbianas que contêm hidratos de carbono, associando o LYSMD3 à sinalização de reconhecimento de padrões e à modulação de respostas inflamatórias em células mieloides e em tipos celulares de barreira. A perturbação dessas vias de deteção pode influenciar programas de citocinas, a defesa epitelial e as interações com o microbioma. Assim, o LYSMD3 é de interesse em estudos de redes de sinalização inflamatória e em contextos de doença nos quais a imunidade inata desregulada contribui para a patologia.

LYSMD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LYSMD3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LYSMD3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LYSMD3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LYSMD3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LYSMD3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LYSMD3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LYSMD3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LYSMD3 em células tumorais com expressão de LYSMD3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.